荧光法快速检测氨基酸的含量及应用
作 者 : 赵进洲
学位授予单位 : 河南师范大学
学位名称 : 硕士
导师姓名 : 程定玺
学位年度 : 2016
关键词 : 荧光光谱法；氨基酸；络合比；反应机理；稳定常数
摘 要 : 氨基酸是一类同时含有氨基和羧基的有机化合物的统称。他是组成生物大分子：蛋白质的基本单元,是生物体的一种重要的营养物质。作为一种生物体的必须的营养物质,氨基酸不仅用来合成蛋白质,它还是动物饲料和食品的一种重要的营养成分,在临床医学上还可以用来预防和治疗各种疾病,在一些化工产品中氨基酸也是一种重要的有效成分。但是氨基酸也不是补充的越多越好,因为氨基酸和蛋白质无法在人体内长时间储存,所以过量的氨基酸会增加肝肾的负担,长时间的氨基酸过剩会引发糖尿病。因此建立一种有效的氨基酸的测定方法就显得十分的重要。目前比较成熟的氨基酸测定方法有化学法：凯氏定氮法和甲醛滴定法,光化学方法：分光光度法,色谱法：薄层色谱法、纸上色谱法、液相色谱法、气象色谱法及毛细管电泳色谱法,还有电化学分析法和氨基酸自动分析仪法。但是这些方法普遍存在测定过程繁琐,测定花费比较高和测定灵敏度低等问题。相对来说,荧光光谱法具有测定时间短、操作简单、灵敏度高、检出限低和线性范围宽等优点,所以建立一种荧光光谱法来实现对氨基酸的定量测定是一件十分有意义的事情。本文主要分为以下三个主要的内容：1：简述氨基酸的不同分类和在日常生活中用途,概括总结原始的氨基酸的测定方法原理和优缺点,介绍荧光光谱法测定氨基酸的基本原理。2：建立了几种荧光光谱法对实现对氨基酸的定量检测：（1）在B-R缓冲溶液中（pH=9.6）的环境中,钙黄绿素和Ni2+发生络合反应,钙黄绿素发生荧光猝灭的现象,当再向该体系中加入一定量的甘氨酸后,体系的荧光强度随着加入的甘氨酸的量的增加而增加,且荧光强度的增加量和加入的甘氨酸的量在一定范围内成正比。基于这种发现,我们建立了一种新的荧光检测方法来检测甘氨酸的含量。（2）在pH为2.8的Clark-Lubs和CTMAB的环境中,荧光探针水扬基荧光酮可以和Cu2+发生络合反应,致使荧光探针发生荧光猝灭,但是在加入一定量的甲硫氨酸后体系的荧光强度又开始增大,而且荧光强度的增加量和甲硫氨酸的加入量在一定范围内呈现良好的线性关系,由此我们建立了一个用荧光法来测定甲硫氨酸方法。（3）在pH=10.8的Kolthoff的缓冲溶液中和CTMAB存在的条件下,荧光探针钙黄绿素可以和Cu2+发生反应使钙黄绿素发生荧光猝灭,但是在加入一定量浓度的脯氨酸以后,在相同的条件下测定体系的荧光值,可以发现在加入一定量的脯氨酸后体系的荧光强度明显的增大,并且在一定的范围内荧光强度的增大量和加入的脯氨酸的量呈现良好的线性关系,在此基础上我们建立了一种荧光光谱法来测定脯氨酸的含量。3：运用等摩尔连续变换分光光度法,探究了荧光探针和金属离子之间的作用机理并测定了生成物的络合比和络合物的稳定常数。
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